1．[2018·安徽芜湖高三一模]请回答基因工程方面的问题：
(1)基因工程中目的基因的来源是______________和______________。
(2)实践中常用某些病毒载体作为基因工程工具，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有的条件是______________、________________(答出两点即可)。在基因表达载体中，启动子的功能是______________。定性检测目的基因表达产物可采用__________________的方法。
(3)让人干扰素基因在大肠杆菌细胞中正确表达，需要将该目的基因中______________除去；若将该基因表达载体导入牛受精卵细胞常用方法是________________________________
_______________________ __________________________。
(4)假设以大肠杆菌质粒作为运载体，以同种限制酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体、目的基因片段和DNA连接酶混合。在适宜条件下可能产生的环状 DNA 分子有______________、______________、______________。
【解析】 (1)基因工程中目的基因的来源有两个方面：一是从生物材料中分离；二是人工合成目的基因。(2)用某些病毒载体作为基因工程的载体，除具备普通“质粒载体”的条件外，还应具有对靶细胞具有较高的转化效率和在宿主细胞中不会引起免疫排斥等条件。在基因表达载体中，启动子的作用是RNA聚合酶识别并结合的部位，启动转录过程。目的基因表达产物为蛋白质，将它看作抗原，可用抗体进行定性检测，所以检测方法是抗原—抗体杂交法。(3)人干扰素基因是真核基因，与原核基因的区别是含有内含子，所以将人干扰素基因导入大肠杆菌细胞中，要使其正常表达，则需要将该目的基因中内含子除去；若将目的基因表达载体导入牛受精卵细胞常用方法是显微注射法。(4)用环状质粒作为运载体，以同种限制酶切割质粒与目的基因，将切割后的质粒、目的基因片段与DNA连接酶混合，在适宜条件下可能产生的环状 DNA 分子有三种情况：质粒(运载体)自连、目的基因片段自连和质粒(运载体)与目的基因片段相连。
【答案】 (1)从生物材料中分离 人工合成目的基因
(2)对靶细胞具有较高的转化效率 在宿主细胞中不会引起免疫排斥 RNA聚合酶识别并结合的部位，启动转录过程 抗原－抗体杂交
(3)内含子 显微注射法
(4)运载体自连 目的基因片段自连 运载体与目的基因片段相连
2．[2018·安徽滁州高三期末]苹果等果实的果肉细胞液泡中有丰富的无色的多酚类营养物质，其他一些囊泡结构中含有多酚氧化酶(PPO)，催化多酚氧化成褐色物质，此过程称为果实褐变。科学家利用基因沉默技术培育了一种不褐变的转基因苹果。回答下列问题：
(1)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是__________________，该方法中需将目的基因插入到农杆菌的__________________上。
(2)培育不褐变的苹果采用的是第二代基因工程技术，导入的是苹果细胞原本就有的多酚氧化酶基因(PPO基因)，当细胞内有许多份PPO基因时，PPO基因____________________形成的mRNA之间容易形成双链区而失去________________机会，从而导致多酚氧化酶含量大大减少。基因沉默分为转录水平的沉默(TGS)和转录后水平的沉默(PTGS)，则培育不褐变苹果的转基因沉默属于______________(填“TGS”或“PTGS”)。
(3)可用________________酶从苹果基因组中切取PPO基因，也可用PCR技术从苹果基因组中克隆出PPO基因，则要实现PCR定点克隆DNA片段，最关键的是设计________________。
【解析】 (1)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，此外还有基因枪法、花粉管通道法等；该方法中，应该将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T－DNA(可转移DNA)上。(2)PPO基因通过转录形成mRNA，若形成的mRNA过多，相互之间容易形成双链区，导致不能正常翻译形成蛋白质(多酚氧化酶)，导致多酚氧化酶含量大大降低；由于以上过程导致翻译不能正常进行，因此属于转录后水平的沉默(PTGS)。(3)PPO基因为目的基因，可以利用限制酶对其进行切割；实现PCR定点克隆DNA片段的技术是PCR，该技术最关键是设计引物序列。
【答案】 (1)农杆菌转化法 Ti质粒的T—DNA
(2)转录 翻译 PTGS
(3)限制 引物序列
