1．(2018·湖北宜昌市一中月考)利用葡萄汁生产的葡萄酒、葡萄醋深受市场欢迎。某校一生物实验小组尝试使用罐头瓶在常温(21±3 ℃)下制作葡萄酒。请回答：
(1)开始时，向消毒的罐头瓶中加入新鲜的葡萄汁作为酵母菌的液体培养基，培养基一般含有______________和无机盐。葡萄汁装入瓶中要留出大约1/3的空间。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。通气的目的是______________。在以后的过程中，每隔12小时左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的目的是____________________。
(2)从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌，常使用的接种方法是________和________两种。若计数酵母菌活菌的个数，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在________之间、适于计数的平板。也可在显微镜下用____________直接计数。
(3)分离纯化出的酵母菌在－20 ℃长期保存，菌液中需要加入一定量的________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。
答案 (1)水、碳源、氮源 提高酵母菌的数量 排出CO2，防止杂菌污染
(2)平板划线法 稀释涂布平板法 30～300 血细胞计数板
(3)甘油
解析 (1)微生物分离与培养的培养基成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐；葡萄汁装入瓶中要留出大约1/3的空间。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭，通气的目的是让酵母菌进行有氧呼吸，从而大量繁殖，提高酵母菌的数量。在酒精发酵过程中，酵母菌无氧呼吸会产生酒精和二氧化碳，为了排出CO2，防止杂菌污染，需要每隔12小时左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧。
(2)从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌，常使用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法两种；若计数酵母菌活菌的个数，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板；也可在显微镜下用血细胞计数板直接计数。
(3)分离纯化出的酵母菌在－20 ℃长期保存，菌液中需要加入一定量的甘油。
