三、多聚酶链式反应扩增DNA片段
1.PCR:多聚酶链式反应的简称,是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。
2.扩增方向:总是从子链的5′端向3′端延伸。
3.需要引物的原因:DNA聚合酶不能从头合成DNA,而只能从引物3′端延伸DNA链,因此DNA复制需要引物。
4.原理:热变性原理,
5.条件:DNA模板,分别与两条模板链相结合的两种引物,脱氧核苷酸,耐热的Taq DNA聚合酶,同时控制温度。
6.过程:变性(高温 94℃)、复性(低温55℃)、延伸(中温72℃)
7.结果:DNA聚合酶只能特异地复制处于两引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。